拒绝污染与变性！离心机分离要点总结

发布时间：2021/3/1 13:10:53      浏览:

　　从相关文献资料了解到离心机的离心分离方法还是以它的分离范围广，容量等优势存在着；可以研究天然生物大分子的流体动力学特性；可以在电离介质中进行生物大分子的片段分离；对缓冲剂限制很小（在电泳技术中由于电流的热效应而限制了缓冲剂的使用）等等。另外在各种实验方法的前处理阶段，离心法还是被广泛的使用着。考虑到各个研究部门的设备分布情况，在很多条件下，离心分离的使用还具有相当的广泛性。作为有效的分离纯化方法，差分离心、速率区带密度梯度离心和等密度离心在生物大分子的研究中还占有重要地位。

　　离心机分离要点：

　　1） 防止污染：

　　要避免在实验过程中由于生物大分子部分受损而引起降解或变性，引起降解的原因很多，如实验过程中的外力作用；某些酶污染等等，但最常见的原因是酶的作用。

　　实验过程中由于污染某些脱氢酶进入样品而使生物大分子变性。

　　（2） 避免变性的其他注意事项：

　　（i）转头在离心前预冷到接近离心温度（在冰箱中放置过夜，或在恒温箱中保温）。对于超速离心机，其制冷系统主要用于抵消转头在稀薄空气中高速运转（转头表面线速度从亚因速—>超因速）时气动力摩擦产生的热量。在真空中，只有辐射传热的情况下，高速运转的转头温度从室温（如夏天30~35℃）降到5℃时间很长（如1 小时左右）一般应预冷到接近离心温度（±2℃）以确保在离心的最初阶段（15 分钟以内）转头温度和样品温度一致。

　　（ii）用固定角式或近垂直管转头或垂直管转头作梯度离心时必须利用离心机的慢加速（0~500rpm ）、慢减速（500rpm~0）功能，以保证梯度方向的顺利转换。

　　（iii）离心开始、离心结束都要小心地轻放和轻取离心管，避免大的震动。

　　（iv）卸样过程应在无震动的实验台上进行，环境温度和离心温度相近，卸样方法应选择平稳、外力作用很小的方式，尽可能不用泵输送样品。

　　3） 梯度离心也有其相关要点，这一块内容相对复杂，要参考很多文献资料，感兴趣得朋友可以自行去了解一下：

　　（1）B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

　　（2）M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

　　（3）D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

　　（4）C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

　　（5）余兴明，"质粒DNA的超速离心分离""生命的化学"1994.1

　　（6）余兴明"血清脂蛋白的离心分离""生命的化学"1997.3

　　（7）余兴明"离心技术"设备与方法概论上海生物物理学会1986，1993年）。

　　以上就是关于离心机得简单解说，离心机虽然只是一款小型分离设备，但是它得作用，价值，是很大得，所以要多了解离心机才能多发掘它得作用与价值！