PCR实验分区少不了掌上离心机

发布时间：2021/4/8 15:09:56      浏览:

　　掌上离心机也可以称为迷你离心机，用于微量实验。

　　常见得应用有：

　　1、全血中提取血清。

　　2、各种样品提取上清液。

　　3、样品快速沉降。

　　4、微量血细胞分离。

　　5、微生物样品处理。

　　6、PCR实验分区离心。

　　以最后一个实验为例，

　　了解PCR实验分区就要先了解气溶胶，气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，在气体与液体面摩擦时，操作时比较剧烈地摇动反应管，离心机离心，扩增后PCR产物开盖时、吸样时及移液器枪反复吹吸样品时都可形成气溶胶而污染。

　　综上所述，为了得到好的实验结果，PCR反应需要进行严格的实验分区：

　　常规需要设置3个独立的分区：试剂耗材储存与准备区、样品处理和样品制备区，扩增检测区，各区域空间完全独立；实验室实施空气流向控制，扩增前和扩增后区域应具有独立的通风系统，扩增后区域保持负压状态，其他区域保持常压，防止扩增产物进入扩增前的区域。

　　PCR实验防止污染的方法：

　　(一)合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应 与其它步骤严格分开。zui好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用，实验前应将实 验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA或RNA。

　　(二)吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题。由于操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。

　　(三)预混和分装PCR试剂:所有的PCR试剂都应小量分装，如有可能，PCR反应液应预先配制好，然后小量分装，-20℃保存。以减少重复加样次数，避免污染机会。另外，PCR试剂，PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱。

　　(四)防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用。

　　(五)设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增条带的zui低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。

　　(六)减少PCR循环次数，只要PCR产物达到检测水平就适可而止。

　　(七)选择质量好的离心机管，以避免样本外溢及外来核酸的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。

　　PCR实验分区仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和掌上离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。