通过实验室离心机深入了解细胞

发布时间：2022/8/26 14:48:58      浏览:

　　通过实验室离心机采用差速离心法实现细胞内各种成分的分离，从而了解细胞核以及线粒体并进行鉴定。

　　分离纯化的方法：

　　根据细胞器的大小、形状、密度等物理特性差异，离心成为亚细胞组分分离过程中最广泛应用的技术。

　　离心是利用旋转运动的离心力以及物质的沉降系数或浮力密度的差异进行分离、浓缩和提纯的一种方法。

　　主要包括差速离心、密度梯度离心等方法。

　　密度梯度离心：

　　·当颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，

　　颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。

　　·两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度，离心时，线粒体和比它沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组分沉到离心管底部。

　　详细实验步骤：

　　动物肝细胞匀浆制备:

　　(1)取出肝脏（2g左右），先用清水冲洗干净后，放在置于冰块上的培养皿中用剪刀剪成小块，去除结缔组织，用生理盐水反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。

　　(2)加入10mL预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液(⑶将悬浮的肝组织液倒入组织捣碎机中进行捣碎，直至没有可见的组织块为止。

　　(4)将肝组织捣碎液分装在50ml离心管中，实验室离心机1500rpm 4°下离心2min (去除大组织块)。

　　用差速离心法分离细胞匀浆中的各种细胞组分：

　　常用介质：

　　常用介质(高溶解性的惰性物质):氯化艳、蔗糖、多聚蔗糖。

　　整个实验过程中除了按规定操作外，要格外注意离心机的使用安全，另外尽可能先充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。